Image J进行Western blot条带灰度分析

安装完image J，打开一张要量化的图片。

Image –> Type -> 8-bit, 将图像转换为8-bit的灰度图片；Image-> Invert，黑白反转，得到如下图片

Analyze –> Calibrate –> function选择Uncalibrated OD，勾选左下方Global calibration。

点击选择方形选框工具，按住左键，在图片上拖动，选择需要分析的条带区域，如图中蓝色方框所示。

键盘上按数字1，弹出如下提示框，点Yes，再键盘上按数字3，得到如下：

峰的面积即灰度值。工具栏中选择直线工具——Straight，下图最右边的为直线工具，按住Shift键使用直线工具画竖线将步骤4的峰进行分割： 

点击选择魔棒工具，然后分别点击每个峰的下方区域，然后就会弹出各个峰面积的结果，分别与条带的灰度值对应，表示条带所代表的蛋白的表达水平。

再通过对beta-actin进行量化的比值，标准化计算得到该Western Blot检测蛋白的量化结果。
参考：https://www.sohu.com/a/319827766_652735

另外一种方法不需要反转颜色，以及Uncalibrated OD，但是感觉结果没有那么准确。